IDENTIFICACION DEL DNA
La medición fiable de la concentración de ADN es importante para muchas aplicaciones en biología molecular. La espectrofotometría y la fluorometria, se usan comúnmente para medir la concentración de ADN genómico y plásmido. La espectrofotometría se puede usar para medir cantidades de microgramos de muestras de ADN puro (es decir, ADN que no está contaminado por proteínas, fenol, agarosa o ARN)
La concentración de ADN puede determinarse midiendo la absorbancia a 260 nm (A260) en un espectrofotómetro utilizando una cubeta de cuarzo. Para una mayor precisión, las lecturas deben estar entre 0.1 y 1.0. Una absorbancia de 1 unidad a 260 nm corresponde a 50 μg de ADN genómico por ml (A260 =1 para 50 μg/ml; basado en una longitud de trayectoria estándar de 1 cm. Esta relación es válida solo para mediciones realizadas a pH neutro, por lo tanto, las muestras deben diluirse en un tampón bajo en sal con pH neutro (por ejemplo, Tris· Cl, pH 7,0). Un ejemplo del cálculo involucrado en la cuantificación de ácidos nucleicos cuando se utiliza un espectrofotómetro (ver Medición espectrofotométrica de la concentración de ADN).
Cuando se trabaja con pequeñas cantidades de ADN, como productos de PCR purificados o fragmentos de ADN extraídos de geles de agarosa, la cuantificación a través del análisis de gel de agarosa puede ser más efectiva.