REQUISITOS
Para el practico No 9 del laboratorio cada estudiante deberá de estar con su atuendo para el laboratorio: pijama azul, barbijo, alcohol al 70%, bolsa de plástico, un retazo de tela que no deje pelusas, para limpiar el material, marcador permanente de vidrio, cinta masking de 1,5 cm de ancho.
Extracción del DNA
El aislamiento del material genético es muchas veces el punto de partida para diversos experimentos posteriores en la investigación de enfermedades genéticas, o microorganismos, virus que causan dichos trastornos de salud, por lo tanto, es el paso más crucial en cualquier técnica de biología molecular o biotecnología recombinante.
La extracción del DNA y RNA sigue protocolos con reactivos estandarizados, muchos de los cuales están disponibles en kits comerciales de calidad CONTRALADA, la extracción exitosa de ácidos nucleico de alta calidad de las muestras requiere una interrupción suficiente de los tejidos y las estructuras celulares, la desnaturalización de los complejos de nucleoproteínas, la inactivación de las nucleasas y la purificación de ácidos nucleicos, estos pasos se pueden modificar en función del ácidos nucleico de interés y la fuente de la muestra a ser analizada.
La extracción orgánica es un método que implica el uso de disolventes orgánicos como el cloroformo, fenol con tris fosfato o una mezcla de fenol y cloroformo para desnaturalizar y precipitar las proteínas de la solución de ácidos nucleicos, para eliminar el RNA se utiliza enzimas que degradan este material genético la enzima ARNasa, el DNA obtenido se precipita con etanol absoluto a temperaturas de 0ºC.
La extracción automatizada es un método que utiliza kits comerciales, estos están constituidos por polímeros utilizados en la cromatografía por afinidad, o la utilización de perlas magnética, membranas de silice para aislar el DNA de los linfocitos. Los eventos de estos kits, suelen incluir la lisis celular, inactivación de las nucleasas, unión del DNA a la superficie magnética o la membrana, lavado y elución; estos métodos son rápidos y eficientes reduce el riesgo de contaminación con aerosoles, contaminación cruzada.
Características generales de la extracción del material genético
Lisis: Este paso implica romper las células para liberar el ADN.
Precipitación: Una vez liberado el ADN, se deben eliminar las proteínas y otras impurezas.
Purificación: Después de la precipitación del ADN, se suele purificar aún más mediante métodos basados en columnas.
Concentración: Finalmente, se suele aumentar la cantidad de ADN presente eliminando el líquido restante