REQUISITOS
Para el practico del laboratorio cada estudiante deberá de estar con su atuendo para el laboratorio: pijama azul, barbijo, alcohol al 70%, bolsa de plástico, un retazo de tela que no deje pelusas, para limpiar el material, marcador permanente de vidrio, cinta masking de 1,5 cm de ancho, FOLIO de papel de madera, calculadora y su guía de laboratorio si no esta con todo lo exigido no podrá ingresar al laboratorio.
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La fórmula de medio de LB (Luria Bertani) fue publicada en 1951, para optimizar el crecimiento de la bacteria Shigella. Desde entonces, se elaboraron distintas formulaciones desde los años 50, estos medios se han utilizado ampliamente pare le cultivo de bacterias durante el trabajo con plásmidos y proteínas recombinantes. Sigue siendo uno de los medios mas utilizados para cultivar y mantener cepas recombinantes de E coli en el laboratorio
COMPOSICIÓN
Ingredientes
- Hidrolizado enzimático de caseína
- Cloruro de sodio
- Extracto de levadura
Medio de LURIA BERTANI se utiliza para el cultivo y mantenimiento de cepas recombinantes de cepas de Escherichia coli utilizadas en procedimientos de microbiología molecular. Se basa en la formulación desarrollada por Miller para el crecimiento de cultivos puros utilizados en pruebas genómicas. El caldo Luria Bertani, Miller es ligeramente diferente con una cantidad doble de cloruro de sodio en comparación con los medios originales descritos por Lennox para el cultivo y mantenimiento de cepas recombinantes de Escherichia coli.
PRINCIPIO
El medio contiene hidrolizados enzimáticos de caseína como fuente de aminoácidos y péptidos mixtos, todos los aminoácidos originalmente presentes en la caseína que son esenciales para el crecimiento de microorganismos. El extracto de levadura proporciona complejo de vitamina B. El cloruro de sodio proporciona iones de sodio para el transporte de membrana y también mantiene el equilibrio osmótico del medio.
AJUSTE DEL pH
Antes de la esterilización en autoclave, en algunos laboratorios se ajusta el pH del medio LB a 7,5 u 8 con hidróxido de sodio. Sin embargo, el hidróxido de sodio no proporciona ninguna capacidad de amortiguación de los medios, y esto se traduce en cambios rápidos en el pH durante el cultivo de las bacterias. Como resultado, algunos laboratorios ajustan el pH de LB con 5.10 mmol/L deTris buffer, frecuentemente por dilución a partir de disoluciones de Tris 1 mol/L.
MEDIO DE CULTIVO LURIA BERTANI
El medio de cultivo de Luria-Bertani (LB) es un medio de cultivo rico y no selectivo que se utiliza ampliamente en microbiología para el crecimiento de una variedad de bacterias. Fue desarrollado en 1951 por Esther Lederberg y Stanley Miller, y desde entonces se ha convertido en uno de los medios de cultivo más utilizados en el mundo.
El medio LB está compuesto por tripticasa de soja, extracto de levadura, cloruro de sodio, y agar (si se desea un medio sólido). La tripticasa de soja es una fuente de aminoácidos y péptidos, mientras que el extracto de levadura proporciona vitaminas, minerales y otros factores de crecimiento. El cloruro de sodio proporciona los iones necesarios para el crecimiento bacteriano, y el agar es un agente gelificante que se utiliza para crear un medio sólido.
El medio LB es un medio rico porque contiene todos los nutrientes que la mayoría de las bacterias necesitan para crecer. Es un medio no selectivo porque no contiene ningún ingrediente que inhiba el crecimiento de ninguna bacteria en particular. Esto lo hace ideal para el cultivo de una variedad de bacterias, incluyendo E. coli, Salmonella, Staphylococcus y Pseudomonas.
El medio LB se puede utilizar en una variedad de formas, incluyendo:
- Cultivo de bacterias en placas de agar: Las placas de agar son una forma común de cultivar bacterias en el laboratorio. Para hacer una placa de agar, se vierte el medio LB fundido en una placa de Petri y se deja enfriar. Una vez que el agar se ha solidificado, se puede inocular la placa con bacterias. Las bacterias crecerán en colonias en la superficie del agar.
- Cultivo de bacterias en caldo: El caldo LB es una forma de cultivar bacterias en líquido. Para hacer caldo LB, se disuelve el medio LB en agua y se esteriliza. Una vez que el caldo se ha enfriado, se puede inocular con bacterias. Las bacterias crecerán en el caldo y se pueden transferir a otras placas de agar o a otros medios de cultivo.
- Cultivo de bacterias en matraces: Los matraces son una forma de cultivar grandes cantidades de bacterias. Para hacer un matraz de LB, se disuelve el medio LB en agua y se esteriliza. Una vez que el caldo se ha enfriado, se puede inocular con bacterias. Las bacterias crecerán en el matraz y se pueden utilizar para una variedad de aplicaciones, como la producción de proteínas recombinantes o la investigación de la genética bacteriana.
El medio LB es un medio de cultivo versátil y fácil de usar que se puede utilizar para una variedad de aplicaciones en microbiología. Es una herramienta esencial en el laboratorio y se utiliza en todo el mundo para la investigación y el desarrollo de nuevos productos y tecnologías.
Ventajas del medio LB:
- Rico y no selectivo: El medio LB contiene todos los nutrientes que la mayoría de las bacterias necesitan para crecer y no contiene ningún ingrediente que inhiba el crecimiento de ninguna bacteria en particular.
- Fácil de usar: El medio LB es fácil de preparar y se puede utilizar en una variedad de formas.
- Versátil: El medio LB se puede utilizar para una variedad de aplicaciones, incluyendo el cultivo de bacterias, la producción de proteínas recombinantes y la investigación de la genética bacteriana.
Desventajas del medio LB:
- No es adecuado para el cultivo de todas las bacterias: Algunas bacterias requieren medios de cultivo más especializados que el medio LB.
- Puede ser contaminado fácilmente: El medio LB es un medio rico que puede ser contaminado fácilmente por otros microorganismos.
El medio LB es un medio de cultivo versátil y fácil de usar que se puede utilizar para una variedad de aplicaciones en microbiología. Es una herramienta esencial en el laboratorio y se utiliza en todo el mundo para la investigación y el desarrollo de nuevos productos y tecnologías.
